CEInfinite Massenspektrometrie Direktverbindung Vollsäulenbildgebung isoelektrischer Fokus iCIEF

CEInfinite Massenspektrometrie Direktverbindung Vollsäulenbildgebung isoelektrischer Fokus iCIEF

CEInfinte Massenspektrum-Direktverbindung Vollsäulenbildgebung isoelektrischer Fokus iCIEF

CEInfinite iCIEF-MS Online Coulping Plattform

In der Entwicklung und Herstellung von Proteinbiologischen Produkten, durch die Modifikation nach der Übersetzung(PTMs) und Abbau erzeugen eine elektrische Ladung des ZielproteinsHeterogenitätKörper. BiopharmazeutischeFirmaElektrofokussierung durch Kapillaren(CIEF) und Bildgebung CIEF (iCIEF) zur Quantifizierung von Ladungsisomeren. Die Charakterisierung von Bioladungsisomeren ist für viele Lebenszyklusphasen nützlich, einschließlich Zelllinienselektion, Stabilitätsstudien, Rezepturen undProzessKontrolle, aber diese Charakterisierung erfordert die Isolierung des Proteins in eine einzelne Ladung mit ausreichender ReinheitDestillation von Isomerenzur Downstream-Analyse.

Darüber hinaus vereinfacht die direkte Kopplung des iCIEF an ein Massenspektrometer (MS) zur Charakterisierung den Charakterisierungsprozess erheblich.

AES hat ein CEInfinite-vorbereitetes iCIEF-System und eine proprietäre Separationssäule zur Vollständigen Bilddetektion (WCID) für die Trennung von iCIEF-WCID und die Online-Kopplung mit MS entwickelt, die eine Echtzeitbeobachtung der Dynamik der Separationsfokussierung (iCIEF) und des Migrationsprozesses der anschließenden Trennung von Ladungsisomeren ermöglicht. Während der Druckmigration halten die elektrischen Felder die Proben in den getrennten Kapillären fokussiert. Der Innendurchmesser der Trennkapillaren ist größer, während der Innendurchmesser der Transferkapillaren kleiner ist. Diese Differenz im Innendurchmesser reduziert daher die Diffusion und Ummischung der isolierten Proteinisomere bei der Verlassung der Säule erheblich.

Details

Highlights von CEInfinite iCIEF-MS

• Verbinden Sie iCIEF-MS direkt mit herkömmlichen niedrigen Durchfluss- oder hochempfindlichen Nanoström-ESIs von Thermo Fisher Scientific, Waters und Bruker.

• Jeder Puffer oder jede Lösung kann als Ergänzung verwendet werden. Keine chemische Migration. Protein Ladung Varianten wurden in MS in Abhängigkeit von pI verschieden in der Reihenfolge eingeführt.
  

• CE-MS kann direkt aus einer bestehenden iCIEF- oder CIEF-Methode umgewandelt werden. Eine gute Trennung kann sowohl bei niedrigen als auch bei hohen Probenkonzentrationen erzielt werden.

iCIEF-MS-Analyse von NIST mAb-Proben

iCIEF-UV (Rot) und iCIEF-MS (Blau) ermöglichen eine klare Beobachtung des Profils der Ladungsisomere und erhalten ein ausgezeichnetes MS-Spektrum aller Variantenspitzen, was es uns ermöglicht, die meisten vollständigen NIST-mAb-Ladungsvarianten zu dekonvolluieren.

Die Ergebnisse zeigten, dass die alkalischen Spitzen B1 und B2 hauptsächlich durch Isomerierung von C-Endlysin verursacht wurden, und dass die Säure-Spitze A1-Molekulargewicht kleiner unterscheidet sich von der Hauptspitze, wahrscheinlich aufgrund von Modifikationen wie Dexamid verursacht wurde, was weitere Untersuchungen und Bestätigungen durch die präparative iCIEF erfordert.

Bewertungen von Kunden:

“iCIEF spielt eine entscheidende Rolle bei der Überwachung von Ladungsänderungen während der Entwicklung von Biopharmazeutiken. CEInfinite ermöglicht es uns, qualitative Messungen von Produktvarianten zu erhalten, die von iCIEF erkannt werden, was sehr hilfreich ist, um die chemischen Eigenschaften der Ladungsvarianten zu verstehen. Wenn CEInfinite in Kombination mit dem hochauflösenden präzisen Massenspektrum des Orbitrap MS Systems verwendet wird, erhalten Sie ein detailliertes Verständnis der Produktvarianten und der Produktstabilität.

Kurz gesagt, iCIEF-MS mit CEInfinite ist ein sehr leistungsstarkes Charakterisierungsinstrument in der biopharmazeutischen Entwicklung. "

von Dr. Dan Bach Kristensen

Hauptwissenschaftler von Symphogen